本人甲狀腺髓樣癌的實(shí)驗(yàn)文章

RHOA/ROCK-2信號(hào)通路在甲狀腺髓樣癌中的表達(dá)及意義 汪穎厚（1.中國人民解放軍第202醫(yī)院普通外科） 甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid carcinoma, MTC)是甲狀腺癌中比較少見的類型，約占所有甲狀腺惡性腫瘤的5%~10%[1]，屬中度惡性甲狀腺癌。MTC具有多灶性，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)較早，且有遺傳傾向，預(yù)后一般[2]。近年來甲狀腺癌發(fā)病率迅速增加，MTC的發(fā)病率也隨之升高[3]，但導(dǎo)致其發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制目前尚未明確。研究表明，RET和RAS原癌基因突變可導(dǎo)致甲狀腺濾泡旁C細(xì)胞內(nèi)外區(qū)蛋白構(gòu)象的改變，誘導(dǎo)細(xì)胞增生過度而發(fā)生惡變，引發(fā)MTC[4]。而細(xì)胞的惡性增殖與多種信號(hào)通路的異常激活密切相關(guān)。RHOA/ROCK-2信號(hào)通路受多種上游因子的調(diào)控，通過調(diào)節(jié)其下游NFκB的轉(zhuǎn)錄活性，在眾多生理及病理過程中發(fā)揮作用，尤其在細(xì)胞的增殖、骨架重排、遷移和代謝以及血管重塑等方面起著關(guān)鍵作用[5，6]。實(shí)驗(yàn)證明，RHOA、ROCK-2蛋白在多種惡性腫瘤中存在過表達(dá)，并在其發(fā)生、發(fā)展及侵襲過程中起重要作用[7]。然而，RHOA/ROCK-2在MTC中的表達(dá)及作用目前鮮有報(bào)道。本文擬檢測RHOA、ROCK-2蛋白在MTC中的表達(dá)水平，旨在探討 RHOA/ROCK-2信號(hào)通路是否與MTC的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)性。 1 材料與方法 1.1 材料 1.1.1 標(biāo)本來源及一般資料：收集中國人民解放軍第202醫(yī)院及中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2008年至2012年術(shù)后病理確診為MTC的石蠟樣本30例，包括癌組織及癌旁組織。30例石蠟樣本中，男15例，女15例；年齡25~74歲，中位年齡57歲。依據(jù)2013年NCCN標(biāo)準(zhǔn)臨床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期11例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者13例。 1.1.2 主要試劑：RHOA、ROCK-2多克隆抗體（Santa Cruz公司，美國）均為大鼠抗人抗體，兔抗大鼠二抗（北京中杉金橋公司）；SP法免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色液（福州邁新公司）。 1.2 方法 組織形態(tài)學(xué)檢查：取標(biāo)本中段4 μm切片，行HE 染色及免疫組織化學(xué)染色（RHOA抗體稀釋比例為1︰100，ROCK-2抗體稀釋比例為1︰400）。奧林巴斯AX70U、BX61+DP71成像系統(tǒng)采集圖像，在高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)視野，以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色為陽性，計(jì)算陽性細(xì)胞率，以無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞＜10%為陰性（－），陽性細(xì)胞≥10%為陽性（＋）。 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)以±s表示。采用X2檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，P